HPLC法测定醋酸曲安奈德薄荷软膏中醋酸曲安奈德的含量(2)
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1.5.3 阴性对照溶液 称取不含醋酸曲安奈德的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2 结果
对照品、供试品、阴性对照的色谱图见图1。
2.1 线性关系考察
2.1.1 对照品储备液的制备 精密称取醋酸曲安奈德对照品10.57 mg，置于25 mL量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀备用。
2.1.2 标准曲线的绘制 精密量取醋酸曲安奈德的对照品储备液1、2、3、4、5 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，然后在“1.4项”色谱条件下测定，以峰面积A与浓度C绘制标准曲线，求得回归方程：y=18 664x+22.975(r = 0.999 9)，说明本品浓度在40～200 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.2 精密度试验
取“2.1.1项” 醋酸曲安奈德对照溶液，按“1.4项”色谱条件下测定，连续进样6次，按上述色谱条件测定色谱峰面积，结果RSD = 0.09(n =6)。结果显示本测定方法精密度良好。
2.3 重复性试验
取20090927批号的样品6份，按“1.5.2”项下的方法制备供试品溶液，按“1.4项”色谱条件下测定，测得醋酸曲安奈德的平均标示量为98.26%，RSD = 0.2(n = 6)。说明本法所建立的色谱条件下重现性较好。
2.4 稳定性试验
取20090927批号的样品，按“1.5.2”项下的方法制成供试品溶液，在“1.4项”色谱条件下，分别于0、2、4、6、8 h进样10 μL，测定色谱峰面积，结果RSD = 0.1(n =5)，说明醋酸曲安奈德在8 h内基本稳定。
2.5 回收率测定
精密称定(约相当于醋酸曲安奈德5 mg)已测定含量的样品20090927(标示量98.44%)6份，置50 mL量瓶中，精密加入醋酸曲安奈德对照品约5 mg，按“1.5.2”项下的方法制备供试品溶液，取续滤液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，测得醋酸曲安奈德的平均回收率为99.6%，其RSD = 0.3。
3 讨论
3.1 波长的选择
先将醋酸曲安奈德的对照品溶液在紫外可见分光光度计上测定，在波长190～400 nm之间进行紫外吸收扫描测量吸收光谱，以选择合适的测量波长，两次测定结果表明在波长213.8 nm以及214.0 nm处有最大吸收，考虑2005版药典中醋酸曲安奈德的吸收波长值为240 nm即波长240 nm是醋酸曲安奈德的最灵敏的测量波长并能避开其它物质的干扰。于是本文最终选择240 nm作为检测波长[1，3]。
3.2 样品的前处理方法
2005版药典采用HPLC法测定醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德的含量时，样品的前处理方法是利用醋酸曲安奈德微溶于甲醇，用80℃热水浴溶解主要成分和基质，冷却后过滤除去凝固的基质，一方面减少基质的干扰，另一方面保护色谱柱。提取用振摇和超声两种方法作对比试验，结果显示，用超声法可使醋酸曲安奈德溶解更充分，提取时间更快，故用超声法提取，同时经实验得知超声半小时后，醋酸曲安奈德即能基本溶解完全。由于提取过程容易造成损失和提取不全，因此要注意保证在80℃热水浴中的提取时间，确定为10 min，较药典的2 min长些，以利提高提取率，保证回收率[4-5]。软膏剂中的基质可污染色谱柱，因此在样品前处理时采用冰浴冷却后迅速过滤的方法，使基质完全除去，以期减少对柱子的损害，并使测定结果更加准确，所以一定要在冰浴中冷却2 h以上[3]。
3.3 测定方法的选择
《中华人民共和国药典》2005年版二部中关于醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德的含量测定采用内标法(用炔诺酮做内标)，操作不便，现采用外标法，操作更快速、简捷、可靠，准确度高，重复性好，分离效果好，更适合用于醋酸曲安奈德薄荷软膏中醋酸曲安奈德的质量控制的标准[2，6]。
4 小结
本次试验成功地探索出HPLC法测定醋酸曲安奈德薄荷软膏中醋酸曲安奈德含量的方法。该方法能有效地对成份醋酸曲安奈德进行含量控制，具有操作简便、灵敏、快速等优点，并且结果可靠性高、准确性和重现性好，能保障使用该药人群的利益，所以本方法可以作为醋酸曲安奈德薄荷软膏中醋酸曲安奈德的质量控制方法之一，为今后方法的改进奠定基础。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 [M]. 二部. 2005版. 北京：化学工业出版社，2005：844 ......
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