醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL-6和TNF-α水平影响
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【摘要】 目的 探讨醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL6和TNFα水平影响。方法 选择60只健康昆明雄性小鼠，分为假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。假手术组仅分离颈总动脉，其他四组分离颈总动脉行缺血再灌注。模型制造成功后第2天，假手术组和模型组给予同体积生理盐水，而高中低剂量组分别给予醒脑静注射液，剂量分别为10 ml/kg、5 ml/kg、25 ml/kg，稀释为05 ml后腹腔注射。1次/d，连续注射液5 d。各组小鼠在末次给药后12 h后采用摘除眼球法取血，离心后取血清，采用放射免疫法测定小鼠血清IL6和TNFα水平。结果 模型组IL6和TNFα水平分别高于假手术组，差异有统计学意义(P<005)；高、中、低剂量组IL6和TNFα水平分别低于模型组，差异有统计学意义(P<005)；高剂量组IL6和TNFα水平分别低于中剂量组，差异有统计学意义(P<005)；中剂量组IL6和TNFα水平分别低于低剂量组，差异有统计学意义(P<005)。结论 IL6和TNFа在脑缺血再灌注损伤中表达水平升高，参与了脑缺血再灌注损伤，而醒脑剂注射液能够降低IL6和TNFα表达，对脑缺血再灌注损伤中的炎症反应有一定的抑制作用。
【关键词】 脑缺血再灌注损伤；醒脑静注射液；白介素6；肿瘤坏死因子α
脑缺血再灌注损伤是由于缺血缺氧后，脑细胞在再灌注情况下发生损伤，在此损伤过程中，有多种机制参与，其中炎症反应、氧自由基损伤、钙超载的等起着重要作用。研究认为，脑缺血下诱导的炎症细胞因子如白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)等表达在脑缺血再灌注损伤中其着重要作用。醒脑静注射液是由麝香、栀子、郁金、冰片等成分制成，具有清热泻火，凉血解毒，开窍醒脑之功效。本文观察醒脑静注射液对脑缺再灌注损伤小鼠血清IL6和TNFα水平影响。
1 材料和方法
11 动物
选择健康昆明雄性小鼠共60只，由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供，体重为20~22 g，SPF级。
12 试验仪器、试剂和药物
主要试验仪器：γ放射免疫计数器、离心机等。醒脑静注射液(河北天地药业股份公司生产，国药准字Z41020664，批号：110219)；TNFа和IL6放免检测试剂盒(购于深圳市科润达生物工程有限公司)。
13 脑缺血再灌注损伤小鼠模型
各组小鼠均在25℃下无菌环境下手术造模，10%水合氯醛麻醉，剂量为350 mg/kg。麻醉成功后，仰卧位，四肢固定。分离双侧颈总动脉，4号丝线扣待用，拉紧丝线扣即可阻断血流，松开丝线扣，血流可再灌注。阻断血流后可见小鼠惊厥、呼吸深且慢、心率增加。阻断血流10 min后丝线扣松开血流灌注10 min，而后再次拉紧丝线扣阻断血流10 min，再次松开丝线扣再灌注血流10 min。观察小鼠呼吸心跳，如平稳，可关闭切口。而假手术组仅仅分离出颈总动脉，不阻断血流及再灌注。
14 试验分组和给药方法
试验分为5组：假手术组、模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组小鼠12只。5组均在术后的第二天给药。假手术组和模型组给予生理盐水腹腔注射，体积同其他三组。高、中、低三个剂量组均在造模后第2天给予醒脑静注射液，剂量分别为10 ml/kg、5 ml/kg、25 ml/kg，稀释为05 ml后腹腔注射。1次/d，连续注射液5 d。
15 指标测定
各组小鼠在末次给药后12 h后采用摘除眼球法取血，离心后取血清，采用放射免疫法测定小鼠血清IL6和TNFα水平。具体测定步骤依据试剂盒提供的步骤进行。
16 统计学方法
采用统计学软件SPSS 140进行统计学分析，各组均数比较采用单因素方差分析，组件比较采用t检验，P<005显示差异有统计学意义。
2 结果
各组IL6和TNFα水平测定结果比较:模型组IL6和TNFα水平分别高于假手术组，差异有统计学意义(P<005)；高、中、低剂量组IL6和TNFα水平分别低于模型组，差异有统计学意义(P<005)；高剂量组IL6和TNFα水平分别低于中剂量组，差异有统计学意义(P<005)；中剂量组IL6和TNFα水平分别低于低剂量组，差异有统计学意义(P<005)。见表1。
3 讨论
白介素6属于一种重要的炎症细胞因子。但是，在正常状态下，白介素6水平很低，其在脑内的表达处于低水平状态。但是当脑发生缺血再灌注损伤后，中性粒细胞和巨噬细胞的浸润加强，此时白介素6表达水平升高。而肿瘤坏死因子а在脑组织中主要是由星形细胞和小胶质细胞分泌，肿瘤坏死因子а具有多方面生理作用，它可介导白介素6等多种炎症介质，对免疫过程也有不同程度的调节作用，而肿瘤坏死因子也参与脂质代谢，同时对糖的代谢也有一定的影响[13]。当脑组织发生缺血缺氧及血流再灌注时，肿瘤坏死因子а通过刺激损伤的血管内皮细胞，提高白细胞对血管内皮粘附作用，内皮细胞相关状态发生改变，导致血栓素A2、内皮素等缩血管物质释放增加，从而导致血管收缩，引起血管闭塞。肿瘤坏死因子а能够促使兴奋性氨基酸释放水平提高，神经毒性增强。研究表明，炎症反应在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用。而在脑缺血再灌注损伤中，IL6和TNFа等炎性细胞因子的释放增加，同时二者水平增加可导致级联反应，使血脑屏障受损，局部脑组织发生肿胀，导致神经元损伤，引发局部神经功能缺损症状[4,5]。
本文结果显示，模型组IL6和TNFα水平分别高于假手术组；高、中、低剂量组IL6和TNFα水平分别低于模型组；高剂量组IL6和TNFα水平分别低于中剂量组；中剂量组IL6和TNFα水平分别低于低剂量组。说明IL6和TNFа在脑缺血再灌注损伤中表达水平升高，参与了脑缺血再灌注损伤，而醒脑剂注射液能够降低IL6和TNFα表达，对脑缺血再灌注损伤中的炎症反应有一定的抑制作用。但醒脑静注射液对脑缺血再灌注损伤中的氧自由基损伤、钙超载等机制是否有影响，尚待进一步研究。
参 考 文 献
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[3] Caso JR， Moro MA， Lorenzo P， et al Involvement of IL1 beta in acute stress induced worsening of cerebral ischaemia in rats Eur Neuropsychopharmacol，2007，17(9)：600607.
[4] 吴建华，方云祥法舒地尔对大鼠脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响中国临床药理学与治疗学，2008，13(4)：377.
[5] 陈寿权，王万铁，王明山，等醒脑静对家兔脑缺血再灌注时TNF、IL1、IL6水平及脑超微结构影响的实验研究中国急救医学,2000,20(11)：637.
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